КнигоПровод.Ru29.03.2024

/Наука и Техника/Биология

Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами — Остерман Л. А.
Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами
Остерман Л. А.
год издания — 1983, кол-во страниц — 304, тираж — 9000, язык — русский, тип обложки — мягк., масса книги — 360 гр., издательство — Наука
цена: 299.00 рубПоложить эту книгу в корзину
Сохранность книги — хорошая

Утверждено к печати Институтом молекулярной биологии АН СССР

Формат 60x90 1/16. Бумага книжно-журнальная. Печать высокая
ключевые слова — молекулярн, белк, нуклеин, электрофорез, центрифуг, изоэлектрич, эндосмос, пааг, фаррелл, изотахофорез, лимф, иммун, изотоп, сцинтилл, радиоактивн, фотоумножител, хемолюминесц, фотолюминесц, солюбил, радиограф, мечен, рнк, днк

В книге продолжены детальное описание и анализ современных методов исследования, используемых в молекулярной биологии (см.: Л. А. Остерман. «Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование», 1981 г.). Для каждого метода дано подробное описание его существа и первоначальных приёмов постановки эксперимента, необходимого оборудования и реактивов, затем следует тщательный анализ влияния выбора параметров эксперимента на его результаты. Описание метода заключает обзор всех его новейших вариантов и модификаций по материалам, опубликованным в периодической научной литературе на середину 1982 г.

Книга рассчитана на биохимиков, биологов, медиков и фармакологов.

Табл. 2, илл. 79, библиогр. 232 назв.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Часть первая
ИЗОЭЛЕКТРИЧЕСКОЕ ФОКУСИРОВАНИЕ
 
Введение3
 
Глава 1
Сущность метода4
Миграция белков в градиенте рН5
Амфолиты для ИЭФ7
Создание градиента рН9
Проблема электропроводности11
Свойства продажных амфолитов13
Опасность образования слоя чистой воды15
Разрешающая способность. Выбор диапазона рН15
Физико-химические особенности амфолитов18
Эндосмос19
 
Глава 2
Аналитические варианты ИЭФ20
ИЭФ в горизонтальных пластинах ПААГ20
ПААГ для ИЭФ20
Использование мочевины и детергентов24
Подготовка пластин и прибора26
Внесение препарата29
Электрический режим и время ИЭФ31
Измерение рН33
Окрашивание белковых зон34
ИЭФ в трубках ПААГ38
ИЭФ в горизонтальных пластинах агарозы42
 
Глава 3
Двумерное фракционирование белков45
Метод О'Фаррелла45
Модификации метода О'Фаррелла48
Электрофорез в формирующемся градиенте рН53
Расшифровка картин двумерного фракционирования белков по методу
О'Фаррелла
56
Использование ИЭФ во втором направлении58
Электрофорез белков перпендикулярно градиенту рН60
 
Глава 4
Препаративные варианты ИЭФ60
ИЭФ в слое гранулированного геля60
Приготовление рабочего слоя геля61
Внесение препарата63
Электрический режим ИЭФ63
Обнаружение и элюция белков64
ИЭФ в градиенте плотности раствора сахарозы67
Конструкция колонки67
Заполнение колонки68
Внесение препарата68
Рабочий режим ИЭФ69
Опорожнение колонки70
Специфические проблемы70
Выбор полярности электродов70
Опасность выпадения осадков71
Проблема растворимости72
Максимальная загрузка73
Получение амфолитов для узких диапазонов рН73
Колонки фирмы «ISCO»74
 
Глава 5
Изотахофорез75
Литература79
 
Часть вторая
ИММУНОЭЛЕКТРОФОРЕЗ
 
Введение81
 
Глава 1
Основы иммунохимии82
Защитный аппарат организма высших животных82
Компоненты крови82
Фагоцитоз, комплемент и цитоинтоксикация84
Лейкоциты86
Антитела89
Лимфатическая система и селезёнка90
Затухание иммунного ответа93
Динамика иммунизации93
Создание иммунологического арсенала94
Структура иммуноглобулинов95
Общий план структуры. Классы иммуноглобулинов95
Области связывания антигенов99
Неоднозначность иммунного ответа101
Синтез и сборка молекул иммуноглобулинов103
Клетки миеломы и гибридомы104
Получение иммунной сыворотки и очистка антител105
Иммунизация кролика105
Приготовление антисыворотки107
Очистка иммуноглобулина типа IgG107
Иммуносорбенты для очистки антител109
Получение моноклональных антител с помощью гибридом113
Продажные препараты антител116
Обнаружение и оценка концентрации антител117
Кольцевой тест118
Определение соотношения эквивалентности119
Гемагглютинация и гемолиз121
Реакция связывания комплемента121
Метод Ухтерлони124
 
Глава 2
Использование иммунологических методов для обнаружения белковых
зон после обычного электрофореза и ИЭФ
127
Иммунохимическое обнаружение антигенов в самом геле127
Получение иммунных «реплик»128
Агарозная реплика129
Реплика на диазобумаге129
Реплика на нитроцеллюлозном фильтре133
 
Глава 3
Иммуноэлектрофорез по Грабар и Уильямс134
 
Глава 4
Электроиммунный анализ по Лореллу139
 
Глава 5
Перекрёстный иммуноэлектрофорез144
Метод Кларка и Фримена144
Тандемный перекрёстный иммуноэлектрофорез147
Различные варианты разделения в первом направлении149
Метод наложения полосы ПААГ на гель агарозы150
Введение промежуточного геля151
Метод «слившихся ракет»152
Литература154
 
Часть третья
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ РАДИОАКТИВНЫХ ИЗОТОПОВ
 
Введение155
 
Глава 1
Изотопы, сцинтилляторы и сцинтилляционные счётчики радиоактивности157
Радиоактивные изотопы157
Избыток нейтронов158
Недостаток нейтронов161
Скорость радиоактивного распада163
Суммарная радиоактивность препарата163
Удельная радиоактивность (УА)164
Радиоактивные изотопы без носителя165
Сцинтилляторы166
Жидкие сцинтилляторы167
Спектр интенсивностей световых импульсов170
Эффективность счёта радиоактивности170
Тушение сцинтилляции171
Регистрация γ-излучения. Твёрдые сцинтилляторы172
Принципы устройства жидкостного сцинтилляционного счётчика174
Фотоумножитель174
Линейные и логарифмические усилители175
Ограничение амплитуд импульсов. «Пороги»177
«Шум» прибора179
Схема совпадений180
Счётные устройства181
Точность счёта182
Хемолюминесценция183
Фотолюминесценция184
Флаконы для жидкостных счётчиков184
Черенковское излучение185
γ-Счетчики с твёрдым сцинтиллятором187
Регулирование (настройка) жидкостного сцинтилляционного счётчика188
Настройка одного канала для счёта одного изотопа189
Настройка двух каналов для счёта двух разных изотопов191
Учёт тушения при счёте одного изотопа193
Учёт тушения при счёте двойной метки198
Настройка двух каналов для регистрации двойной метки (3Н и 14С)
в счётчике с линейными усилителями201
Счёт двойной метки (3Н и 125I) в жидкостном сцинтилляционном
счётчике202
 
Глава 2
Способы приготовления и регистрации радиоактивных препаратов203
Препараты в виде водных растворов203
Сцинтилляторы на основе диоксана203
Сцинтилляторы на основе толуола и ксилола206
Некоторые дополнительные замечания209
Солюбилизация биологических препаратов210
Счёт радиоактивности на фильтрах213
Подготовка препаратов к счёту213
Эффективность счёта. Выход радиоактивности217
Счёт радиоактивности порошков220
Счёт радиоактивности после ТСХ и электрофореза в геле220
Растворение ПААГ в H2O2221
Растворение ПААГ без H2O2 с помощью солюбилизаторов221
Элюция белков и нуклеиновых кислот из геля222
Авторадиография223
Непрямая авторадиография226
Флюорография227
Количественное определение радиоактивности232
Регистрация двойной метки (3Н и 14С) в ПААГ232
Сканирование пластинок торцевыми счётчиками233
Регистрация радиоактивности в протекающей жидкости235
 
Глава 3
Введение радиоактивной метки в белки236
Иодирование с помощью Хлорамина Т236
Иодирование с помощью H2O2 и лактопероксидазы239
Присоединение специальных иодированных реагентов241
Иодирование за счёт Na125I в присутствии ICl244
Введение 14C и 3H245
Ферментативные методы249
 
Глава 4
Введение радиоактивной метки в нуклеиновые кислоты250
Химические реакции250
Метилирование за счёт меченого диметилсульфата250
Включение 3H из тритиевой воды с помощью метабисульфита натрия250
Медленный изотопный обмен водорода251
Введение 3H на З'-конец олигорибонуклеотида (метод Рандерата)251
Комплекс денатурированной ДНК с меченой N-метоксиаминокислотой253
Иодирование нуклеиновых кислот253
Ферментативные реакции254
Т4-полинуклеотидкиназа255
Концевая дезоксинуклеотидилтрансфераза256
Т4-РНК-лигаза257
ДНК-полимераза I из Е.coli (фермент Корнберга)258
 
Глава 5
Введение радиоактивной метки в белки и нуклеиновые кислоты in vivo261
Высшие животные262
Культуры клеток высших организмов263
Микроорганизмы265
 
Глава 6
Определение концентрации веществ методом изотопного разбавления266
 
Глава 7
Радиоиммунные методы269
Иммунопреципитация и сорбция из раствора270
Система двух антител270
Использование Staphylococcus aureus и белка А, закреплённого на
сефарозе275
Радиоактивно меченные антитела277
Радиоактивно меченный белок А278
Конкурентные радиоиммунные методы (КРИМ)279
КРИМ с преципитацией иммунного комплекса281
КРИМ с фильтрованием285
Твердофазный КРИМ286
Сканирование колоний микроорганизмов292
Ферментативно-иммунные методы293
Некоторые дополнительные замечания об использовании радиоактивных
изотопов
295
 
Литература297

Книги на ту же тему

  1. Разделение клеточных частиц и макромолекул, Альбертсон П., 1974
  2. Курс прикладной радиохимии, Макаров Л. Л., 1966
  3. Физическая биохимия: Применение физико-химических методов в биохимии и молекулярной биологии, Фрайфелдер Д., 1980
  4. Метод меченых атомов в биологии, Кузин А. М., ред., 1955
  5. Введение в количественную цитохимию, Вид Д., 1969
  6. Беседы о ядерной медицине. — Изд. 2-е, доп. и перераб., Цыб А. Ф., Королюк И. П., Капишников А. В., 2009
  7. Радиация. Дозы, эффекты, риск, 1990
  8. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: Электрофорез и ультрацентрифугирование (практическое пособие), Остерман Л. А., 1981
  9. Итоги науки и техники: Молекулярная биология. Том 22, Киселев Л. Л., Михайлов В. С., ред., 1986
  10. Биофизика: Учебник. — 3-е изд., испр. и доп.: В 2 т. (комплект из 2 книг), Рубин А. Б., 2004
  11. Статистическая физика макромолекул: Учебное руководство, Гросберг А. Ю., Хохлов А. Р., 1989
  12. Нервное возбуждение: Макромолекулярный подход, Тасаки И., 1971
  13. Молекулярная биология и медицина, Коротяев А. И., Лищенко Н. Н., 1987
  14. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение, Глик Б., Пастернак Д., 2002
  15. Введение в молекулярную биологию: От клеток к атомам, Рис Э., Стернберг М., 2002
  16. Молекулярные механизмы апоптоза лейкозной клетки, Волкова Т. О., Немова Н. Н., 2006
  17. Молекулярные механизмы зрительной рецепции, Каламкаров Г. Р., Островский М. А., 2002
  18. Молекулярная биология клетки: Сборник задач, Уилсон Д., Хант Т., 1994
  19. Введение в молекулярную биологию. — 2-е изд., перераб., Бреслер С. Е., 1966
  20. Введение в молекулярную медицину, Пальцев М. А., ред., 2004
  21. Молекулы и клетки. Выпуск 7, Георгиев Г. П., ред., 1982
  22. Использование радиоактивности при химических исследованиях, Валь А., Боннер Н., ред., 1954
  23. Биохимия: Молекулярные основы структуры и функций клетки, Ленинджер А. Л., 1974
  24. Химия белка: Сборник статей, Ботвинник М. М., ред., 1969
  25. Химия белка. Часть 2, Ашмарин И. П., Садикова Н. В., Тукачинский С. Е., Мюльберг А. А., 1971
  26. Физико-химические свойства нуклеиновых кислот: Электрические, оптические и магнитные свойства нуклеиновых кислот и их компонентов, Дюшен Ж., ред., 1976
  27. «Белок-машина». Биологические макромолекулярные конструкции. — 2-е изд., доп., Чернавский Д. С., Чернавская Н. М., 1999
  28. Растворы высокомолекулярных соединений. — 2-е изд., Воюцкий С. С., 1960
  29. Макромолекулярная химия желатина, Вейс А., 1971
  30. Макромолекулярные реакции, Платэ Н. А., Литманович А. Д., Ноа О. В., 1977
  31. Беседы о новой иммунологии. — 2-е изд., Петров Р. В., 1978
  32. Методы иммунохимического анализа в биологии развития (практическое руководство), Михайлов А. Т., Симирский В. Н., 1991
  33. Регуляция иммунного ответа, Кульберг А. Я., 1986
  34. Иммунологические методы, Фримель Г., ред., 1987
  35. Что, если Ламарк прав? Иммуногенетика и эволюция, Стил Э., Линдли Р., Бландэн Р., 2002

© 1913—2013 КнигоПровод.Ruhttp://knigoprovod.ru