Просто и ясно написанное руководство для биологов и медиков, использующих в своих исследованиях электронный микроскоп; особенно большую ценность книга представляет дли начинающих исследователей. Рассмотрены теоретические основы электронной микроскопии; методы фиксации, обезвоживания, заливки; ультрамикротомия; контрастирование; интерпретация полученных картин; электронно-микроскопическая цитохимия и радиоавтография; ряд дополнительных методик.

Предназначена для биологов и медиков различных специальностей, для студентов и преподавателей биологических факультетов университетов, медицинских и сельскохозяйственных институтов.

Читатель, которому адресована книга Б. Уикли, определён самим автором — начинающий микроскопист, пожелавший спуститься (или подняться?) до уровня макромолекул. Лет 10—15 назад таких людей во всём мире можно было пересчитать по пальцам. И только за последние годы электронный микроскоп превратился из уникального, «экзотического» прибора в обычный, доступный большинству биологов инструмент исследования. Спектр использования микроскопов различных типов в биологии чрезвычайно широк — от систематики растений и энтомологии до молекулярной биологии и генетики. Чрезвычайно многочисленны и разнообразны и те методические подходы, которые используются для приготовления препаратов. Если ещё учесть, что от момента фиксации препарата до получения фотографий его ультраструктуры проходит 1—2 недели, то станет понятным, насколько трудоёмки современные методики электронно-микроскопических исследований. Своеобразие работы в этой области состоит также и в том, что, несмотря на более чем 20-летнюю историю развития, в электронной микроскопии до сих пор нет устоявшихся, общепринятых методических приёмов. Каждый опытный исследователь вносит собственные модификации в методы, в каждой лаборатории существуют свои «секреты», которые остаются секретами не потому, что их тщательно оберегают, а потому, что в публикуемые статьи часто невозможно включить все те методические тонкости и уловки, которые используются в повседневной работе. Поэтому для начинающих особенно важно поработать несколько месяцев в хорошо оснащённой лаборатории, где в качестве основного метода исследований используется электронная микроскопия. К сожалению, такой путь по ряду причин не всегда доступен; зачастую начинающим приходится «вариться в собственном соку». В этом случае хорошим советчиком и помощником могут служить такие руководства по технике электронной микроскопии, как книга Б. Уикли.

Эта книга — не простой перечень тех методических приёмов, которые используются в электронной микроскопии. Автор делится такими, казалось бы, незначительными подробностями работы, от которых во многом зависит успех исследований. Руководство охватывает практически все разделы электронной микроскопии, включая такие новейшие методы, как сканирующую и высоковольтную микроскопию. Однако наиболее детально Б. Уикли описывает методические приёмы, связанные с подготовкой биологических объектов для просвечивающей электронной микроскопии. Главы, посвящённые приготовлению сеток, плёнок-подложек, фиксации, заключению образца, могут служить хорошим пособием в повседневной работе не только для начинающего, но и для опытного микроскописта. Однако, так как руководство адресовано именно начинающим, необходимо сделать некоторые замечания относительно ряда методик. Так, Уикли подробно описывает способ фиксации ткани по Паладу и метод заключения ткани в эфиры метакриловой кислоты (метакрилаты). В настоящее время метакрилаты вышли из употребления, так как эти заливочные среды обладают рядом крупных недостатков: высокой экстрагирующей способностью, сильной усадкой при полимеризации и т. д. Также практически не используется фиксация по Паладу (1%-ный OsO₄, приготовленный на веронал-ацетатном буфере), так как этот фиксатор экстрагирует из ткани слишком большое количество белков. С некоторой осторожностью необходимо относиться и к таким новейшим приёмам цитохимии, как, например, реакция на выявление РНК. Действительно, последовательное использование для окраски срезов уранилацетата, ЭДТА и свинца позволяет выявить в ядре и цитоплазме клеток РНК-содержащие структуры, однако нет строгих доказательств, что такой способ обработки вызывает повышение контраста только РНК-содержащих структур. Вообще, начинающий исследователь должен отдавать себе отчёт в том, что во многих разделах электронной микроскопии до сих пор преобладает эмпирический подход. Так, не разработано строго научных рекомендаций относительно способа фиксации материала, нет работ по химии контрастирования ультратонких срезов, в «зачаточном состоянии» находятся цитохимические методики электронной микроскопии. Именно поэтому некоторые приёмы, используемые в электронной микроскопии, можно вслед за Уикли назвать «искусством».

Нельзя согласиться также с некоторыми рекомендациями Уикли, касающимися обслуживания электронного микроскопа. Как показывает практика работы многих лабораторий нашей страны, наиболее целесообразно иметь в штате лаборатории квалифицированного инженера, который вёл бы постоянное наблюдение за эксплуатацией электронного микроскопа, осуществлял бы профилактический осмотр прибора, его юстировку и т. д. Это не только продлило бы срок службы такого дорогого прибора, как электронный микроскоп, но и позволило бы наиболее полно использовать его возможности.

В заключение, адресуясь опять-таки к начинающим, можно сказать, что мало овладеть всеми тонкостями электронно-микроскопических методик. Применение такого чрезвычайно трудоёмкого метода, как электронная микроскопия, будет оправдано только в том случае, если поставленную конкретную научную задачу невозможно решить никаким другим методом.

Предисловие к русскому изданию
В. Ю. Поляков

Книги на ту же тему

1. Физическая биохимия: Применение физико-химических методов в биохимии и молекулярной биологии, Фрайфелдер Д., 1980
2. Биохимия цитоплазмы, Хесин Р. Б., 1960
3. Биологические ультраструктуры, Финеан Д., 1970
4. Беседы о рентгеновских лучах, Власов П. В., 1977
5. Оптика микроскопов. Расчёт и проектирование, Панов В. А., Андреев Л. Н., 1976
6. Архитектоника чешуи костистых рыб и её диагностическое значение: теоретические основы современных методов экспертного исследования, Чернова О. Ф., Дгебуадзе Ю. Ю., 2008
7. Введение в электронную микроскопию минералов, Сергеева Н. Е., 1977