Биология

Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: Электрофорез и ультрацентрифугирование (практическое пособие)

год издания — 1981, кол-во страниц — 288, тираж — 8000, язык — русский, тип обложки — твёрд. 7Б, масса книги — 360 гр., издательство — Наука

КНИГА СНЯТА С ПРОДАЖИ

Сохранность книги — хорошая

Утверждено к печати Институтом молекулярной биологии АН СССР

Формат 60x90 1/16. Бумага книжно-журнальная. Печать высокая

В книге детально описана современная аппаратура, изложены практические приёмы постановки экспериментов, проанализировано влияние на их результаты различных физико-химических параметров. Рассмотрены все варианты и модификации описываемых методов. Даны ссылки на оригинальные экспериментальные работы, опубликованные в ведущих журналах мира по декабрь 1980 г.

Книга рассчитана на биохимиков, медиков, фармакологов, работников пищевой промышленности.

Табл. 4, илл. 77, библиогр. 294 назв.

Часть первая
ЭЛЕКТРОФОРЕЗ

Введение	3

Глава 1
Гели для электрофореза	7
Полиакриламидный гель (ПААГ)	7
Исходные материалы	7
Процесс полимеризации ПААГ	10
Выбор концентраций мономеров	13
Агароза	16
Смешанный гель (агароза+ПААГ)	20
Ацетатцеллюлозная плёнка, импрегнированная ПААГ	21

Глава 2
Техника приготовления гелей и аппаратура	21
Вертикально расположенные трубки	21
Вертикально расположенные пластины	26
Горизонтально расположенные пластины	32

Глава 3
Электрофорез белков	37
Замечания общего характера	37
Миграция белков в геле	37
Напряжённость электрического поля (H)	38
Выбор буфера рабочего геля	40
Выделение тепла при электрофорезе	42
Загрузка геля. Ширина белковых зон	44
Введение мочевины и β-меркаптоэтанола. Некоторые артефакты	46
Лидирующие красители	47
Разделение белков по размерам и заряду	48
Выбор рабочего буфера	48
Использование мочевины	50
Загрузка геля и подготовка препарата	52
Некоторые примеры	53
Разделение белков по размеру с использованием ДДС-Na	56
Существо метода	56
Выбор пористости геля	59
Присутствие мочевины и неполных детергентов	60
Выбор рабочего буфера геля	61
Подготовка белкового препарата	62
Проведение электрофореза	63
Окрашивание и элюция белков	64
Ступенчатый электрофорез (disc-electrophoresis)	66
Градиент пористости ПААГ	73
Двумерный электрофорез в ПААГ	76
Электрофорез с использованием Тритона Х-100 и цетавлона	83
Тритон Х-100	83
Цетавлон	85
Окрашивание белков в ПААГ	88
Кислые красители	90
Другие красители и методы окрашивания	94
Флюоресцентные красители	97
Локализация ферментов после электрофореза	101
Локализация белковых полос осаждением ДДС-Na	104
Элюция белков из геля	105
Определение радиоактивности белков после электрофореза в ПААГ	109
Счёт радиоактивности в элюатах белка	109
Растворение ПААГ	110
Импрегнирование сцинтиллятора в гель	111
Авторадиография	112
Флюорография	113
Препаративный электрофорез белков	116

Глава 4
Электрофорез нуклеиновых кислот	120
Замечания общего характера	120
Выбор буфера геля и напряжённости электрического поля	120
Выбор характера геля и его пористости	121
Влияние вторичной структуры	123
Маркерные молекулы	125
Лидирующие красители	126
Электрофорез в мягких условиях	126
Фракционирование плазмид и фрагментов ДНК	126
Фракционирование РНК	128
Электрофорез в денатурирующих гелях	128
Щелочные гели	129
Гели, содержащие мочевину. Секвенирование ДНК и РНК	131
Денатурирующие гели с формамидом	135
Денатурирующие гели с формальдегидом	138
Гели, содержащие гидроокись метилртути	140
Денатурация нуклеиновых кислот глиоксалем	142
Использование градиентов пористости ПААГ	142
Двумерный электрофорез нуклеиновых кислот и их фрагментов	144
Некоторые особые случаи электрофореза нуклеиновых кислот	147
Электрофорез в геле агарозы тройного комплекса
ДНК—РНК-полимераза—РНК	147
Выявление мРНК при электрофорезе суммарной РНК в геле агарозы	148
Использование жидкого (не сшитого) ПААГ	149
Окрашивание нуклеиновых кислот после электрофореза	150
Элюция нуклеиновых кислот из гелей	153
Элюция из ПААГ за счёт диффузии	153
Элюция из гелей агарозы	154
Электрофоретическая элюция	158
Перенос нуклеиновых кислот из геля на нитроцеллюлозные фильтры
и диазобумагу	162
Определение радиоактивности	165
Препаративный электрофорез нуклеиновых кислот	166
Литература	168

Часть вторая
УЛЬТРАЦЕНТРИФУГИРОВАНИЕ

Введение	174

Глава 1
Основные понятия теории седиментации	175

Глава 2
Ультрацентрифуга	177
Принцип действия и расположение важнейших узлов	177
Проверка готовности основных систем к пуску	179
Пуск центрифуги	180

Глава 3
Роторы и пробирки	182
Угловые роторы	182
Пробирки для угловых роторов	184
Уход за роторами и пробирками	187
Роторы со свободно подвешенными пробирками (бакет-роторы)	189
Роторы с вертикальными пробирками	191
Максимально допустимая частота вращения ротора	191
Зональные роторы	193
Особенности эксплуатации и ухода	197

Глава 4
Раздельное осажденме частиц (дифференциальное центрифугирование)	199

Глава 5
Зонально-скоростное центрифугирование	201
Константа седиментации	203
Изокинетический градиент плотности	204
Выбор среды	206
Характеристики растворов сахарозы	210
Профиль градиента сахарозы	213
Создание градиента плотности сахарозы	214
Наслоение препарата на градиент	219
Фракционирование («раскапывание») градиента	220
Выбор режима центрифугирования	223
Некоторые примеры центрифугирования в градиентах сахарозы	232
Фракционирование рибонуклеопротеидов	232
Фракционирование РНК	235
Фракционирование ДНК	237

Глава 6
Равновесное (изопикническое) центрифугирование	240
Способы образования и общая характеристика градиентов плотности	241
Выбор соли для создания градиента плотности	247
Градиенты плотности растворов CsCl	250
Преформирование градиента	251
Равновесное центрифугирование в угловых роторах	253
Центрифугирование в роторах с вертикальными пробирками	257
Фракционирование и детектирование равновесных градиентов	258
Примеры центрифугирования в градиентах плотности растворов CsCl	259
Градиенты плотности растворов Cs₂SO₄	263
Градиенты плотности трихлорацетатов цезия и рубидия	267
Градиенты плотности растворов KI и NaI	268
Градиенты плотности растворов метризамида	270

Глава 7
Центрифугирование в зональных роторах	275

Литература	277
Предметный указатель	279

Книги на ту же тему

Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами, Остерман Л. А., 1983
Физическая биохимия: Применение физико-химических методов в биохимии и молекулярной биологии, Фрайфелдер Д., 1980
Введение в количественную цитохимию, Вид Д., 1969
Путешествие в мир живой клетки, де Дюв К., 1987
Физико-химические свойства нуклеиновых кислот: Электрические, оптические и магнитные свойства нуклеиновых кислот и их компонентов, Дюшен Ж., ред., 1976
Разделение клеточных частиц и макромолекул, Альбертсон П., 1974
Биофизика: Учебник. — 3-е изд., испр. и доп.: В 2 т. (комплект из 2 книг), Рубин А. Б., 2004
Молекулярная и клеточная биофизика, Франк Г. М., ред., 1977
Молекулы и клетки. Выпуск 7, Георгиев Г. П., ред., 1982
Молекулярная биология: Избранные разделы. — 2-е изд., испр. и доп., Ашмарин И. П., 1977
Введение в молекулярную биологию, Хаггис Д., Михи Д., Мюир А., Робертс К., Уокер П., 1967
Искусственный интеллект: применение в химии, Пирс Т., Хони Б., ред., 1988
Итоги науки и техники: Молекулярная биология. Том 22, Киселев Л. Л., Михайлов В. С., ред., 1986
Биологическая химия: Учебник, Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф., 1983
Химия белка. Часть 2, Ашмарин И. П., Садикова Н. В., Тукачинский С. Е., Мюльберг А. А., 1971
Химия белка: Сборник статей, Ботвинник М. М., ред., 1969
«Белок-машина». Биологические макромолекулярные конструкции. — 2-е изд., доп., Чернавский Д. С., Чернавская Н. М., 1999
Организация аппарата трансляции хлоропластов и его роль в биогенезе мембран, Филиппович И. И., 2006
Растворы высокомолекулярных соединений. — 2-е изд., Воюцкий С. С., 1960
Макромолекулярная химия желатина, Вейс А., 1971
Иммунологические методы, Фримель Г., ред., 1987
Методы иммунохимического анализа в биологии развития (практическое руководство), Михайлов А. Т., Симирский В. Н., 1991

http://knigoprovod.ru

/Наука и Техника/Биология

ОГЛАВЛЕНИЕ

Книги на ту же тему